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2020/12/21 12:03:21

tissuelyser組織研磨機對提取小鼠尾巴RNA的實驗步驟

Source：Shanghai Jingxin

實驗步驟

1、首先將上海凈信的組織研磨機上的制冷模塊預(yù)先置于適當(dāng)?shù)臏囟认?，使用時取出安裝好。將研磨珠去RNA酶處理。

2、隨機抽取小鼠的尾巴，把樣本剪成盡可能小段，置于無RNA酶的離心管中（選擇耐液氮冷凍管子），同時加入幾顆研磨珠。

3、放置于液氮中一起浸泡幾分鐘，取出放置于預(yù)冷模塊中，在全自動樣品研磨儀上選擇合適的研磨時間和研磨頻率。（該步驟可以根據(jù)研磨的細微程度要求可以再重復(fù)一遍）

4、把研磨好的樣本加入的PBS和RNAiso Plus（此處選擇PBS，可以根據(jù)實驗需要加入其他提取液，如TRIzol等），繼續(xù)置于研磨機上選擇合適的研磨時間和研磨頻率。樣本將處于糊狀。（其他提取試劑有可能會出現(xiàn)泡沫，不影響實驗）

5、取出研磨管，放入冷凍離心機中，選擇適當(dāng)?shù)臏囟冗M行離心幾分鐘。

6、小心吸取上清液至新的離心管中，蓋上管蓋，在室溫上孵育十幾分種，使樣品充分裂解至勻漿液較透明，如果仍有少量顆粒屬于正常情況，不影響RNA提取質(zhì)量和得率。

7、在離心管中加入氯仿，蓋緊管蓋，振蕩混勻并將其在冰上孵育幾分種，選擇適當(dāng)?shù)臏囟冗M行離心幾分鐘。離心后混合物分層：上清層，中間層，下層；RNA存在于上清層中。

8、將上清層小心轉(zhuǎn)移到一干凈的離心管中，加入等體積冰浴的異丙醇，顛倒振蕩混勻，將混合的樣品在適當(dāng)?shù)臏囟葪l件下，孵育幾分種，選擇適當(dāng)?shù)臏囟冗M行離心幾分鐘。RNA沉淀通常形成片狀沉淀附著于管壁或管底。

小心棄去上清，用冰浴的乙醇洗滌RNA沉淀一次，顛倒洗滌離心管管壁，并旋渦振蕩樣品，盡可能讓沉懸浮，選擇適當(dāng)?shù)臏囟冗M行離心幾分鐘，再次去除上清，晾干沉淀。

10、操作的最后，在陰涼處適度干燥RNA沉淀（避免過分干燥，那樣會降底它的可溶性）。

11、用適量的無RNA酶水或TE溶液來溶解RNA。抽提好的RNA，保存于適當(dāng)?shù)臏囟认隆?/p>